幸运飞艇的技巧和方法

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常用培养基的选择、制备、灭菌与消毒
 选择基本培养基时,除待培养植物的基因型外,通常应考虑培养基的种类,其总离子浓度、总氮水平及氮源种类(硝态氮和铵态氮)与比例、钙和氯化物的含量等。草本植物组织培养广泛使用的MS培养基,而木本植物组织培养通常采用低盐基本培养基如1/2或1/4MS或WPM(Woody Plant Medium,木本植物培养基)。除总离子浓度外,总氮水平、氮源种类(硝态氮和铵态氮)与比例也对组织培养影响甚大,因此根据具体情况改变基本培养基的氮源类型和浓度,可以提高培养效果[15~17]。
 
不同基因型可能需要不同的基本培养基,但同一种植物在培养的不同阶段或适用于不同的培养目的时,所需基本培养基也不同。通常按培养阶段和目的可划分为启动或诱导培养基、增殖培养基、生根培养基等多种,这种划分可能仅仅是激素的调整,或同一基本培养基某些成分的改变,甚至基本培养基种类的不同。如大多数植物在生根培养时使用1/2~1/4 MS或其他低盐培养基如White培养基,体细胞胚胎发生也经常在不同阶段要改变氮源的类型和比例等。基本培养基种类也可能影响到生长调节物质的作用效果,因此需要考虑不同基本培养基与不同浓度的生长调节物质之间的互作。
 
通常在对一种植物进行组织培养前,首先应查寻同属、同种或同品种植物组织培养的有关资料,参考前人的研究成果。无法查找到有关资料,可以一些著名的基本培养基如MS、WPM或B5等开始试验。如果对现有的基本培养基的筛选效果不理想,可以以MS、WPM或B5等基本培养基为基础进行改良,改良的方法一般有以下几种:
 
(1)将基本培养基的大量成分或无机盐成分减半至减四分之三(1/2,1/3,2/3,1/4,或3/4),或不同基本培养基成分组合如将B5的无机盐成分与MS的有机成分组合在一起等;
(2)增减氮源水平及调铵态氮和硝态氮(铵盐和硝酸盐)的种类和比例,氮源通常对培养物的质量和发育路线影响较大;
(3)增加钙盐,以改善木本植物培养中的钙缺乏;
(4)附加多种维生素、氨基酸及有机添加物,这对营养需求复杂或难培养的植物较为有效;
(5)对植物生长土壤及体内营养物质含量进行测定,给基本培养基改良提供参考;
(6)将无机盐、有机成分及生长素和细胞分裂素划分为高、中、低三个水平,进行81(34)种组合试验,这样更为精确。总之,可通过培养基质量(成分)和数量(浓度)调整,优化和选择与既定植物材料的特定要求相适合的基本培养培养基。
 
植物组织培养基中经常改变的因子是生长调节物质,尤其是生长素和细胞分裂素。生长素和细胞分裂素的种类、数量和比例通常根据经验或激素的性质与功能确定。但更科学的方法是采用单因子试验法和多因子试验法(正交设计),这样可以采用生物统计学方法对结果进行分析。如以一种基本培养基为基础,将生长素(如NAA)和细胞分裂素(如BA)各以 9种浓度水平(0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0 mg/l)组合成81种处理,可以得到好的生长素和细胞分裂素浓度水平的组合。正交设计虽然科学合理,考虑到了两类激素之间的互作,但工作量较大。
 
实践中也可以采用固定生长素浓度,改变细胞分裂素种类或浓度,选择优的细胞分裂素种类和浓度;以及反过采用同样的方法也可对生长素进行选择。或者有时为减少工作量,可代表性地配制数量较少的几种组合(如生长素浓度相对高的一种,细胞分裂素浓度高的一种,生长素和细胞分裂素相平衡的一种),首先确定那类较为适合,然后根据适合的一类,利用单因子或多因子试验法进一步确定最适激素组合。确定最适光照和温度等因子的方法也同此。
 
制备、灭菌与消毒:
一、实验目的 
了解培养基的配制原理;掌握配制培养基的一般方法和步骤;了解常见灭菌、清毒基本原理及方法;掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。 
 
二、实验原理 
培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同,培养基也有不同的种类和配制方法。 
 
牛肉gao蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供微生物生长繁殖之用。 
 
干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。 
 
三、试剂与器材 
1.器材 
试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等。 
 
2.试剂 牛肉gao、蛋白胨、NaCl、琼脂 
 
四、实验内容 
1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查 
2.干热灭菌:装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物 
3.高压蒸汽灭菌:加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查 
4.过滤除菌:组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌 
 
五、关键步骤及注意事项 
1.要严格按配方配制。 
2.调pH不要过头。 
3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧,注意温度的时间控制,70ºC以下放物、取物。 
4.高压灭菌要注意物品不要过多,加热后排除冷空气,到时降压回零取物。 
5.过滤除菌要注意各部件灭菌,压滤时,压力要适当,不可太猛太快,滤膜要注意清洗保存。
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